114年:(醫檢)檢驗(2)
在比較配對檢體之蛋白質的差別,下列何種分離方法可以最有效減少操作過程的誤差?
A二維電泳分析( 2D-PAGE)
B磁珠親和分離法( Beadbased affinity fractionation )
C螢光染劑標示二維凝膠電泳( fluorescent two dimensional difference in -gel electrophoresis, fluorescent 2D -DIGE)
D膠體過濾層析法( gel filtration chromatography )
詳細解析
本題觀念:
比較配對檢體之蛋白質差異時,要顧慮不同樣本在分離與顯像過程中所產生的「gel-to-gel variation」與操作誤差。傳統 2D-PAGE 雖能高解析分離蛋白,但分別於多張凝膠上電泳、後製染色與比對時,因凝膠批次與處理步驟差異造成定量誤差;而 2D-DIGE(fluorescent two dimensional difference in-gel electrophoresis)將不同樣本先以波長可區分的 CyDye 螢光染劑分別標示,再混合同膠電泳並利用內部標準池做正規化,可最大幅度降低實驗變異。
選項分析
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選項A:二維電泳分析(2D-PAGE)
- 核心原理:IEF 第一維依 pI 分離,SDS-PAGE 第二維依分子量分離,後製染色 (Coomassie/銀染) 後影像比對。
- 問題:不同凝膠之間 pH 梯度、聚丙烯醯胺濃度、電場均一性、染色/顯像條件差異大,spot 位置與強度的 gel-to-gel variation 高 (CV 可達 55–80%),需多張技術複本且耗時費力 (openprairie.sdstate.edu)。
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選項B:磁珠親和分離法(Bead
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