114年:(醫檢)微生(2)

有關製備 sheep blood agar 的步驟,下列何者最適當?

A添加綿羊血的培養基一起經高溫高壓滅菌
B培養基先經高溫高壓滅菌,冷卻至 55℃再加入綿羊血
C綿羊血須先經濾紙過濾法滅菌後,才能加入培養基中
D添加綿羊血的培養基一起經濾紙過濾法滅菌

詳細解析

本題觀念:

製備 sheep blood agar 的關鍵在於保留紅血球的完整性及功能,以呈現可供觀察菌株溶血型的血液成分,同時避免高溫破壞血球。要先對一般培養基進行高壓滅菌,再將溫度降至不會造成紅血球破裂的範圍(約45–55℃),再無菌加入已去纖維蛋白且無菌的綿羊血。

選項分析

  • 選項A
    若將培養基與綿羊血一起經高溫高壓滅菌,血液中的紅血球與蛋白質會在121℃下完全變性與溶解,喪失原有顏色與凝集功能,造成培養基無法呈現預期的溶血現象,且營養成分亦受破壞。因此 A 錯誤。

  • 選項B
    先將基底培養基(如 Trypticase Soy Agar)經121℃、15 psi、15 分鐘高壓滅菌後,冷卻至約55℃(臨界溫度在45–55℃之間),再無菌加入5–10% 的無菌 defibrinated sheep blood,混勻後分裝成板。此法可保持紅血球完整且無菌,為正確步驟。(fda.gov)

  • 選項C
    雖然對液體溶液可使用0.22 μm濾膜過濾來去除微生物,但紅血球體積遠大於濾孔尺寸,過濾不但無法通過血球,且會破壞血液成分;實務上綿羊血通常以

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