113年:(醫檢)檢驗(2)
PCR反應中，primer決定了核酸放大的特異性，在設計primer時的考慮，下列何者最適當？
Aprimer的secondary structure會減少標的PCR產物合成的產量
B調整primer的長度，可改變primer annealing的溫度，溫度最好限制在40～50℃
Cprimer 本身的5'端和3'端形成互補時，會形成primer dimer
Dprimer 的3'端可加上與模板非互補的序列，增加primer的應用性
詳細解析
本題觀念
本題聚焦於PCR引子(primer)設計原則，特別是如何避免引子自身或引子之間產生不當的二級結構，以維持放大效率與特異性。
選項分析
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選項A primer的secondary structure會減少標的PCR產物合成的產量
引子若在序列內部形成hairpin或自我二聚體(self-dimer)，會佔據可用的可結合狀態，妨礙與模板結合，導致放大產率下降。多份指引建議「避免引子secondary structure，因其會大幅降低產物產量」 (stg73.oorjit.net)。此選項正確。 -
選項B 調整primer的長度，可改變primer annealing的溫度，溫度最好限制在40～50℃
引子長度影響熔解溫度(Tm)，而最佳Tm通常介於52–70℃之間（建議annealing溫度一般設定在Tm下約5°C處），並非40–50℃ (medicilon.com)。若annealing太低，
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