113年:(醫檢)檢驗(2)
實體腫瘤常處於不穩定的狀態且異質性（heterogeneity）高，探索癌細胞未知的基因突變可以做為未來分子檢驗或藥物治療的標的。下列何種方法最適合檢測癌細胞未知的基因突變？
A肽核酸聚合酶連鎖反應（PNA-PCR）
B即時定量聚合酶連鎖反應（real-time qPCR）
C增幅阻礙突變系統（ARMS）
D次世代定序（next-generation sequencing）
詳細解析
本題觀念：
探討實體腫瘤高度基因不穩定與異質性下，如何發現未知的基因突變以作為未來分子檢驗或標靶藥物開發；不同分子檢測技術在「已知熱點 vs. 未知變異」與「目標式 vs. 非目標式」策略上的適用性比較。
選項分析
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選項A PNA-PCR
PNA (peptide nucleic acid)-mediated PCR clamping透過PNA探針特異性結合野生型序列，抑制其擴增，藉此放大少量已知突變序列，靈敏度可達0.1% mutant allele fraction (pubmed.ncbi.nlm.nih.gov). 但須先設計針對特定熱點突變的PNA，無法用於全序列篩檢或發現未知變異。 -
選項B real-time qPCR
Allele-specific real-time PCR針對已知序列設計探針或引子，具有高靈敏度與相對定量能力，操作簡易、成本低，但僅能檢測預先定義好的基因座，multiplex數目有限，缺乏發現新突變的能力 ([illumina.com](https://www.illumina.com/science/technology/next-generation-se
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