113年:(醫檢)生化(2)
下列那一種方法在進行核酸分子拷貝數(copy number)定量檢驗時,不需要製作標準曲線或與實驗控制組進行相對定量?
A即時定量聚合酶鏈鎖反應(real-time quantitative PCR)
B多重連接依賴性探針擴增法(multiplex ligation-dependent probe amplification, MLPA)
C微陣列核酸晶片(microarray chip)
D數位化聚合酶鏈鎖反應(digital PCR)
詳細解析
本題觀念:
聚合酶鏈鎖反應(PCR)與相關分子技術在核酸拷貝數定量時,可分為「絕對定量」(absolute quantification)與「相對定量」(relative quantification)。絕對定量代表可直接算出樣本中分子絕對拷貝數,理論上不需外加已知濃度標準品(standard curve)或與對照組比值;相對定量則需與已知標準曲線或內參/對照組比較,才能推算目標基因在樣本中的相對量。
選項分析
- 選項A:即時定量 PCR(real-time quantitative PCR, qPCR)
qPCR 常見的絕對定量方法是製作標準曲線,再將未知樣本的 Ct 值對照至曲線上推算拷貝數;或以相對定量法(ΔΔCt)搭配內參基因反映目標基因量的變化。兩者都要有已知濃度標準或對照組,才能得到定量結果(thermofisher.com)。
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