113年:(醫檢)免疫病毒(2)
有關傳統PCR的敘述，下列何者最不適當？
A其原理可分成三階段：denature、annealing及extension
B過高的annealing溫度會降低檢測的靈敏度（sensitivity）
C需使用耐高溫的RNA polymerase
D使用低保真度（low fidelity）的酵素進行增幅的錯誤率會較高
詳細解析
本題觀念：
傳統PCR的基本原理涉及三大溫度循環階段（變性、退火、延伸），以及選用熱穩定DNA聚合酶的必要性。理解各階段溫度設定對擴增效率、靈敏度和特異性的影響，同時掌握酵素校對機制（fidelity）對錯誤率的調控。
選項分析
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選項A
傳統PCR確實可分為三階段：denature（變性）、annealing（退火）及extension（延伸）。變性步驟於94–98°C 打開雙股DNA，退火步驟於50–65°C 使引子與單股模板結合，延伸步驟於72°C 由DNA聚合酶合成新股DNA。此敘述正確。 (blog.praxilabs.com) -
選項B
退火溫度若過高，會使引子無法有效結合模板，導致擴增產率下降、檢測靈敏度降低；文獻明確指出高退火溫度可能使PCR無產物或產物稀少。此敘述正確。 ([biotechrabbit.com](https://www.biotechrabbit.com/support/technical-support/qpcr-troubleshooting.html?utm_source=openai
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