設計PCR條件時，引子（primer）黏合到DNA 模板（annealing）的溫度需要被優化。下列何者與決定annealing反應之最適溫度最無關？

本題觀念：

本題聚焦在PCR反應中的「annealing temperature（引子與模板DNA結合溫度）」之優化設計。annealing溫度需依據primer-template duplex的穩定性來設定，過高會造成引子無法有效結合、產量下降；過低則易導致non-specific binding，產出假陽性或雜訊條帶。

選項分析

• 選項A：PCR緩衝液之鹽類濃度
  PCR反應中鹽類（如Na⁺、Mg²⁺）會影響DNA雙股的穩定性，鹽濃度越高，負電荷間的排斥作用被屏蔽，雙股更穩定，Tm會上升，因此salt correction是Tm計算中重要一環 (cloud.tencent.com)。

• 選項B：引子的GC content
  GC pair間有三條氫鍵，比AT pair的兩條氫鍵更穩定。primer中GC含量越高，duplex穩定性越高，Tm越大，annealing溫度要相應提高 (medicilon.com)。

• 選項C：PCR產物的片段長

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