113年:(醫檢)免疫病毒(1)

以電泳分析病毒蛋白時,蛋白通常先經sodium dodecyl sulfate(SDS)與下列何種化學藥品處理後,破壞其二級結構,再進行電泳?

A2-mercaptoethanol
Bacetone
Cformaldehyde
Dchloroform

詳細解析

本題觀念:

探討 SDS-PAGE 中蛋白質線性化及帶電方式。SDS 透過破壞蛋白的二級與三級結構並均勻包覆負電荷,而還需搭配還原劑切斷二硫鍵(disulfide bonds),才能完全破壞蛋白的三維結構,達到依分子量分離的目的。

選項分析

  • 選項A 2-mercaptoethanol
    β-mercaptoethanol(β-ME)為常用還原劑,可切斷蛋白內、間鏈的二硫鍵,協同 SDS 破壞蛋白二級、三級構象,達到完全線性化。符合 SDS-PAGE 標準樣品緩衝液配方(openwetware.org)。

  • 選項B acetone
    Acetone 常用於蛋白質沉澱或組織脫水,不具破壞二硫鍵功能,與 SDS-PAGE 樣品製備無關,無法線性化蛋白。

  • 選項C formaldehyde
    Formaldehyde 用於蛋白質或細胞固定,可在蛋白間形成交聯(methylene bridges),反而加強構象穩定性,與破壞二級結構目的相反。

  • 選項D chloroform
    Chloroform 為有機溶劑,常用於脂質抽提或核酸分離,並不切斷二硫鍵或破壞蛋白二級結構,故不適用於 SDS-PAGE 樣

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