112年:(醫檢)檢驗(1)
二維電泳配合蛋白質譜分析的實驗前後順序，下列何者最適當？①特定酵素水解蛋白 ②一維等電點聚焦電泳 ③膠體染色 ④檢體製備 ⑤二維聚丙烯醯胺凝膠電泳
A④②⑤③①
B④①②⑤③
C④③①②⑤
D①②③⑤④
詳細解析
本題觀念：
本題聚焦於蛋白質體學中二維膠電泳(2D-PAGE)結合質譜分析(bottom-up proteomics)的實驗流程順序。核心是在完成樣本製備後，先依等電點進行一維分離，再以SDS-PAGE進行二維分離，接著染色顯影以定位目標斑點，最後再利用酵素(如trypsin)水解取得胜肽進行質譜鑑定。
選項分析
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選項A (④②⑤③①)
④樣本製備→②一維等電點聚焦→⑤二維SDS-PAGE→③膠體染色→①特定酵素水解。
符合2D-PAGE與質譜分析之標準流程：先將蛋白質提取、去鹽並添加抑制劑等完成樣本製備，再以IPG strip做等電聚焦；處理後的膠條放到SDS-PAGE膠上分子量分離；電泳完成後對膠進行染色以定位斑點；最後切出斑點做in-gel digestion，再送質譜分析(mtoz-biolabs.com)。 -
選項B (④①②⑤③)
將酵素水解放在等電聚焦之前，不符bottom-up proteomics概念。真正的酵素消化必須先完成電泳分離並染色定位後，才能從膠中切出特定斑點([totallab.com](https://totallab.co
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