111年:(醫檢)檢驗(2)
關於等位基因特異性寡核苷酸雜交（ allele-specific oligonucleotide hybridization, ASO ）的敘述，下列何者最不適當？
A所使用的探針序列長度有限制，須超過 20 bases
B為了提高檢測的敏感度，可以搭配 PCR 一起執行
C目標差異位點通常位於所設計之探針的中間位置
D目前 ASO已應用在癌症檢測與親子鑑定
詳細解析
本題觀念：
等位基因特異性寡核苷酸雜交（allele-specific oligonucleotide hybridization, ASO）係利用寡核苷酸探針，與目標 DNA 單核苷酸差異序列以高度專一性雜交，判定特定等位基因或突變存在。影響此法特異度的關鍵設計參數包含探針長度、GC 含量、熔解溫度、與差異位點在探針上的位置等。
選項分析
- 選項A 所使用的探針序列長度有限制，須超過 20 bases
ASO 探針通常為 15–21 個核苷酸長度，短於 20 bp 者仍可穩定雜交且具高差異辨識能力；若探針過長（>25 bp），單一核苷酸不匹配時，熱力學差異不明顯，反而難以鑑別突變型與野生型序列(en.wikipedia.org)。因此，說須超過 20 bases 是不正確的。 - 選項B 為了提高檢測的敏感度，可以搭配 PCR 一起執行
ASO 雜交常與 PCR 前置擴增結合（ASO-PCR 或 nested ASO hybridization），可大幅增強靈敏度與特異度，甚至能偵測低頻突變（9–12 mer 探針結合 PCR 擴增）([pubmed.ncbi.nl
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