113年:醫學一(2)
下列何種蛋白質純化方法的專一性(specificity)最好?
A親合力層析法(affinity chromatography)
B離子交換層析法(ion-exchange chromatography)
C膠體過濾層析法(gel filtration chromatography)
D鹽析法(salting-out)
詳細解析
本題觀念:
本題考查的是**蛋白質純化技術(Protein Purification)的原理及其專一性(Specificity)**的比較。在蛋白質純化過程中,專一性指的是純化方法區分「目標蛋白質」與「其他雜質蛋白」的能力。專一性越高的技術,通常能在越少的步驟內(甚至單一步驟)獲得純度越高的產物。
選項分析
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A. 親合力層析法(Affinity chromatography):正確。
- 原理:利用生物分子間具有高度專一性的結合作用(如:抗原與抗體、酵素與受質、受體與配體、或像 His-tag 與鎳離子柱)。這種結合類似「鎖與鑰匙(Lock and Key)」的機制。
- 專一性:極高。因為它針對的是目標蛋白質特定的生物功能或結構標籤,能從複雜的混合物中精準抓取單一目標蛋白,往往在單一步驟(One-step)後即可達到 95% 以上的純度。
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B. 離子交換層析法(Ion-exchange chromatography):錯誤。
- 原理:利用蛋白質在特定 pH 值下的**淨電荷(Net charge)**差異來分離。帶正電的蛋白結合到帶負電的樹脂(陽離子交換),反之亦然。
- 專一性:中等。此法僅能將蛋白質依照「電荷特性
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