ExamWise
115年:(醫檢)檢驗(1)

病毒基因型與疾病病程或治療策略有關，下列何者最不適合用來做病毒基因型鑑定？

Asequencing
Bnucleic acid sequence-based amplification （NASBA）
Creverse hybridization
Dhybridization onto high-density microarrays

詳細解析

本題觀念：

本題考查的是病毒基因型鑑定 (Viral Genotyping) 的常用實驗室方法，並需區分「定性/基因分型」與「定量 (Viral Load)」檢測技術的適用性。

基因型鑑定 (Genotyping) 的目的是區分病毒的亞型 (Subtypes) 或檢測特定的抗藥性突變，這通常需要辨識核酸序列上的具體差異 (Sequence specific identification)。

選項分析

  • A. Sequencing (定序)：

    • 分析：定序 (如 Sanger sequencing 或 Next-Generation Sequencing) 是基因型鑑定的黃金標準 (Gold Standard)。它可以直接讀取病毒核酸的鹼基序列，準確區分不同基因型 (如 HCV 分型) 或偵測抗藥性突變 (如 HIV, HBV, CMV 抗藥性測試)。
    • 結論：非常適合。

  • B. Nucleic acid sequence-based amplification (NASBA)：

    • 分析：NASBA 是一種恆溫核酸放大技術 (Isothermal amplification)，主要針對 RNA 進行擴增。在臨床病毒學中，NASBA 最主要的應用是病毒載量定量 (Viral Load Quantification) (例如：早期測量 HIV-1 RNA copy number)。
    • 理由：雖然 NASBA 結合特定的探針 (如 Molecular Beacons) 技術上可以設計用來偵測特定點突變，但其核心本質是「擴增技術」，且在臨床常規上，NASBA 並非用來進行廣泛基因分型 (Genotyping) 的首選平台。相比之下，定序、晶片和反向雜交都是專門設計來解析序列差異的分析平台。因此，在選項中最不適合作為「基因型鑑定」的通用工具。
    • 結論：最不適合 (主要用於定量)。

  • C. Reverse hybridization (反向雜交)：

    • 分析：這是臨床上非常普遍的基因分型方法，最著名的例子是 Line Probe Assay (LiPA)。
    • 原理：將針對不同基因型設計的特異性探針固定在膜條上，讓病毒 PCR產物與之雜交。根據顯色條帶的位置來判斷病毒屬於哪一型 (例如：HCV Genotyping, HPV Genotyping)。
    • 結論：非常適合。

  • D. Hybridization onto high-density microarrays (高密度微陣列晶片雜交)：

    • 分析：基因晶片 (Microarray) 利用高密度的探針矩陣，可以同時偵測成千上萬個基因序列變異或單核苷酸多型性 (SNPs)。
    • 應用：常用於大規模的病原體篩檢、複雜的基因分型或抗藥性位點分析 (如 Influenza 分型、SARS-CoV-2 變異株監測研究)。
    • 結論：非常適合。

答案解析

正確答案：B

題目詢問「最不適合」用來做病毒基因型鑑定的方法。

  • 選項 A (定序)、C (反向雜交/LiPA)、D (微陣列晶片) 都是臨床與研究上定義病毒基因型的主要工具，原理皆是基於對序列差異的直接讀取或特異性探針雜交。
  • 選項 B (NASBA) 雖然是一種核酸放大技術，但其在臨床檢驗的主要角色是 RNA 病毒的定量 (Viral Load) (如 HIV-1 RNA 定量)，而非基因分型。雖然 NASBA 產物後續可以用來定序或雜交，但單純的 NASBA 技術本身主要用於「放大與定量」，對多樣化基因型的解析能力不如其他三個選項專精。

核心知識點

考生應掌握常見分子診斷技術的主要臨床用途：

  1. 基因型鑑定 (Genotyping) / 抗藥性分析：

    • Sequencing (定序)：黃金標準 (Gold standard)。
    • Reverse Hybridization (Line Probe Assay, LiPA)：常用於 HCV, HBV, HPV 分型。
    • Microarray (晶片)：高通量篩檢與分型。
    • RFLP (限制酶片段長度多型性)：傳統方法，利用酶切圖譜分型。

  2. 病毒載量定量 (Viral Load Quantification)：

    • Real-time PCR (qPCR)：目前最主流。
    • NASBA (Nucleic Acid Sequence-Based Amplification)：恆溫擴增 RNA，專長於 RNA 病毒定量。
    • bDNA (Branched DNA)：訊號放大技術，不擴增目標核酸，用於定量。

參考資料

  1. Clinical Virology Manual: Molecular Diagnosis methods - Genotyping vs Quantification.
  2. CDC Guidelines for Hepatitis C: Use of Line Probe Assays and Sequencing for HCV Genotyping.
  3. NASBA Technology: BioMérieux NucliSens® (NASBA primarily marketed for HIV-1 viral load monitoring).
了解本站架構