下列何種波長適用於測定蛋白質胜肽鍵（ Peptide bond ）的吸光度？

本題觀念：

本題主要考查蛋白質的紫外光吸收光譜特性，特別是區分「胜肽鍵（Peptide bond）」與「芳香族胺基酸（Aromatic amino acids）」各自的吸收波長。

選項分析

• A. 220 nm（正確）

  • 原理：蛋白質骨架中的**胜肽鍵（Peptide bond, -CONH-）**在遠紫外光區（Far-UV）有強烈的吸收。
  • 機制：主要來自羰基（C=O）的 $n \to \pi^*$ 電子躍遷（約 210-220 nm）以及 $\pi \to \pi^*$ 電子躍遷（約 190 nm）。
  • 應用：在 205-220 nm 波長下測定吸光度（如 $A_{205}$ 或 $A_{214}$、$A_{220}$），其靈敏度遠高於 280 nm，且因為所有蛋白質都含有胜肽鍵，此波長的吸光值與蛋白質的胺基酸組成較無關，更適合用於缺乏芳香族胺基酸的蛋白質定量。但需注意緩衝液成分在此區域可能會有背景干擾。

• B. 280 nm

  • 原理：這是蛋白質定量最常用的波長。
  • 機制：主要來自具有共軛雙鍵系統的芳香族胺基酸，特別是色胺酸（Tryptophan, Trp）和酪胺酸（Tyrosine, Tyr），以及少量

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