直接免疫螢光染色試驗檢測（使用 FITC ）病毒抗原的試劑含有Evans blue，其作用目的為何？

本題觀念：

本題考查的是直接免疫螢光染色法 (Direct Immunofluorescence, DIF) 的原理，特別是複染 (Counterstaining) 在螢光顯微鏡判讀中的應用。在病毒抗原檢測中，為了區分特異性螢光訊號與背景組織，常需使用背景染色劑來提供對比。

選項分析

• A. 背景染色劑 (Background stain) [正確]
  • 原理：在直接免疫螢光試驗中，目標病毒抗原被標記有 FITC (Fluorescein isothiocyanate) 的抗體結合後，在螢光顯微鏡下會發出蘋果綠色 (Apple-green) 的螢光 (激發波長約 490 nm，發散波長約 520 nm)。
  • Evans blue 的作用：Evans blue 是一種偶氮染料，在螢光顯微鏡激發下會發出紅色螢光。當它作為複染劑 (Counterstain) 加入試劑中時，會將未感染的細胞或背景組織染成紅色。
  • 目的：這提供了紅綠對比 (Green specific signal vs. Red background)，有助於檢驗師在黑暗的視野中定位細胞，確認檢體細胞是否存在，並抑制非特異性的自體螢光 (Autofluorescence)，使特異性的綠色病毒螢光

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