110年:(醫檢)檢驗(1)
下列何種分子檢驗的方法會使用雜交( Hybridization )來鑑定人類白血球抗原( HLA )?
A序列特異性聚合酶連鎖反應( Sequence-specific primer-polymerase chain reaction; SSP-PCR )
B特異性寡核苷酸探針( Sequence-specific oligonucleotide probe; SSOP )
C原位螢光雜交( Fluorescence in situ hybridization; FISH )
D異源雙鏈分析( Heteroduplex analysis )
詳細解析
本題觀念:
本題考查的是人類白血球抗原(HLA)分型技術中的分子檢驗方法原理。 HLA 分型主要分為血清學法(已少用)與分子生物學法(DNA-based typing)。分子生物學法中,最常見的三種傳統技術為:
- 序列特異性引物 PCR (PCR-SSP):利用引物的 3' 端與特定對偶基因序列互補來決定擴增與否。
- 序列特異性寡核苷酸探針 (PCR-SSOP):先進行通用擴增,再利用探針與產物進行雜交來鑑定。
- 序列分析 (SBT):直接定序。
選項分析
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A. 序列特異性聚合酶連鎖反應(SSP-PCR):
- 原理:利用設計特定的引物(Primer),其 3' 端完全對應到特定的 HLA 對偶基因序列。若序列相符,PCR 才能順利進行並產生擴增產物;若不相符則無產物。
- 鑑定方式:檢測是否有「擴增產物」(通常使用凝膠電泳)。
- 分析:雖然引物結合也是一種廣義的雜交,但在分類上,此法是依靠「擴增作用(Amplification)」的有無來鑑定,而非後續的探針雜交訊號,故不符合題意強調的「使用雜交來鑑定」。
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B. 特異性寡核苷酸探針(SSOP):
- 原理:此方法稱為 PCR-Sequenc
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