110年:(醫檢)檢驗(1)

位於臺灣中部某醫院的醫學檢驗科,欲利用 PCR-RFLP 法進行葡萄糖六磷酸去氫酶缺乏症臺灣開平型( 1388G-->A)的檢測,下列那些選項是所需的實驗材料?①水平式電泳槽 ②限制酶 ③ DNA 聚合酶 ④ DNA 連接酶 ⑤水浴槽 ⑥ DNA 萃取試劑 ⑦ RNA 萃取試劑 ⑧毛細管電泳儀

A① ④ ⑤ ⑦
B② ③ ⑤ ⑥ ⑧
C① ② ④ ⑥
D③ ⑦ ⑧

詳細解析

本題觀念:

本題考查PCR-RFLP (聚合酶連鎖反應-限制片段長度多型性) 技術在臨床分子診斷中的應用與實驗流程。

PCR-RFLP 是偵測已知點突變(如 G6PD 缺乏症的特定突變位點)的經典方法。其實驗流程包含以下四個主要步驟,所需的材料對應如下:

  1. 檢體製備 (Sample Prep):從血液中萃取 DNA (需 ⑥ DNA 萃取試劑)。由於是檢測基因體 DNA 上的突變,而非基因表現,故不需要 RNA。
  2. PCR 擴增 (Amplification):針對包含突變點的基因片段進行大量複製。需 ③ DNA 聚合酶 (如 Taq polymerase)、引質 (Primers)、dNTPs、緩衝液與 PCR 反應器。
  3. 限制酶切割 (Restriction Digestion):利用特定的 ② 限制酶 切割 PCR 產物。突變型與野生型序列會因限制酶切位點的有無,而產生不同長度的片段。此步驟通常需在 ⑤ 水浴槽 或加熱塊中進行定溫反應 (通常為 37°C)。
  4. 電泳分析 (Electrophoresis):將切割後的 DNA 片段進行大小分離。傳統使用瓊脂膠電泳 (需 ① 水平式電泳槽),但在現代化臨床實驗室或為了更高解析度與自動化,常使用 **⑧ 毛細管

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