利用凝膠過濾層析法（ Gel filtration chromatography ）的方式分離蛋白質，主要是依據蛋白質的何種性質？

本題觀念：

本題考查的是蛋白質純化技術中的凝膠過濾層析法 (Gel filtration chromatography)，又稱為體積排阻層析法 (Size-exclusion chromatography, SEC) 或 分子篩層析法 (Molecular sieve chromatography)。

這是一種利用「分子大小 (Molecular size)」差異來進行分離的技術。其核心原理是利用具有特定孔徑大小的多孔微珠（Porous beads）作為固定相（Stationary phase）。

• 大分子：因為體積太大，無法進入微珠的孔隙內部，只能在微珠之間的空隙（Void volume）流動，路徑較短，因此最先被沖提（Elute）出來。
• 小分子：可以進入微珠內部的微小孔隙，在層析柱中行走的路徑較長（被暫時滯留），因此較晚被沖提出來。

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選項分析

• (A) 溶解度差異：

  • 錯誤。利用溶解度差異進行分離的技術通常是沈澱法 (Precipitation)，例如鹽析法 (Salting out)。這是利用高濃度的鹽（如硫酸銨）競爭水分子，降低蛋白質的溶解度使其沈澱，與層析法的原理不同。

• (B) 帶電荷多寡：

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