使用 vaccinia virus 當作疫苗載體的開發，通常會將外來基因插入 TK （ thymidine kinase ）基因中，再利用什麼藥物來篩選出重組後的病毒？

本題觀念：

本題考查的是痘病毒（Vaccinia virus）載體系統的篩選機制，特別是利用胸腺嘧啶激酶（Thymidine Kinase, TK）基因作為插入位點時的負向篩選原理。

選項分析

• (A) Tritium thymidine（氚標記胸腺嘧啶）： 這是一種放射性同位素標記的核苷酸，主要用於測量細胞增殖或標記DNA，並非用於藥物篩選或殺死病毒。

• (B) Bromodeoxyuridine（BrdU，溴去氧尿苷）：這是正確答案。

  • 原理：BrdU 是一種胸腺嘧啶（Thymidine）的類似物。
  • 野生型病毒（$TK^{+}$）：含有功能正常的 TK 基因，能將 BrdU 磷酸化。磷酸化的 BrdU 會被嵌入病毒 DNA 中，導致致死性突變或抑制病毒複製，因此野生型病毒死亡。
  • 重組病毒（$TK^{-}$）：外來基因插入導致 TK 基因被破壞（失活）。病毒無法產生功能性 TK 酵素，因此無法磷酸化 BrdU。BrdU 對其無毒性，重組病毒得以存活並形成噬斑（Plaque）。
  • 此篩選方法通常在 $TK^{-}$ 的宿主細胞（如 143B 細胞）中進行，以確保 TK 酵素來源僅由病毒提供。

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