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109年:(醫檢)檢驗(2)

檢體中病毒量少時，需要增加靈敏度及專一性，則做完一次 PCR 後，以其產物為標的，再用另一對引子做一次PCR，稱為：

A巢式 PCR（ Nested PCR ）
B多重 PCR（ Multiplex PCR ）
C限制酶片段長度多型性分析（ RFLP ）
D即時 PCR（ Real-time PCR ）

詳細解析

本題觀念：

巢式 PCR（Nested PCR）是一種兩輪擴增技術，專為提升靈敏度（sensitivity）與專一性（specificity）設計，特別適用於樣本中病毒量極低（low viral load）的情形。

選項分析

(A) 巢式 PCR（Nested PCR） 正確答案。巢式 PCR 執行兩次連續 PCR 反應：第一輪使用外部引子（external primers）擴增一段較大的目標片段；第二輪以第一輪產物為模板，再使用另一對「巢入」於第一輪產物內部的內部引子（internal/nested primers）進行第二次擴增。這樣設計的優點是：

  1. 靈敏度提升：兩輪 PCR 大幅增加循環次數，可從極微量模板中擴增到可偵測量。
  2. 專一性提升：第二輪的內部引子只能與真正目標序列結合；第一輪中非特異性擴增的片段若無內部引子結合位點，不會在第二輪被再次放大，有效降低假陽性。

(B) 多重 PCR（Multiplex PCR） 錯誤。Multiplex PCR 是在單一反應管中同時加入多對引子，一次擴增多個不同目標序列，主要目的是節省時間與樣本量，以及同時偵測多種病原體，並非用來提升單一目標的靈敏度與專一性。

(C) 限制酶片段長度多型性分析（RFLP） 錯誤。RFLP（restriction fra

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