單點突變是導致 HLA 等位基因具高變異性的常見原因之一，下列何種檢測方法不適用於 HLA 等位基因分型？

本題觀念：

人類白血球抗原（human leukocyte antigen, HLA）基因高度多型性，需精確的分型方法。常用的 HLA 分子分型方法包括：DNA 定序法（SBT）、序列特異性引子法（sequence-specific primer, SSP）、序列特異性寡核苷酸探針法（sequence-specific oligonucleotide, SSO），而變性高效能液相層析法（denaturing high performance liquid chromatography, DHPLC）則是一種突變篩查工具，不適用於 HLA 等位基因精確分型。

選項分析

(A) DNA 桑格定序法（Sanger sequencing / SBT） ✅ 適用。桑格定序法（亦稱序列為基礎之分型，sequence-based typing, SBT）是 HLA 分型的黃金標準方法，能直接讀取每一個核苷酸，可鑑定新等位基因，解析度最高（高解析分型）。目前也已擴展至次世代定序（next-generation sequencing, NGS）。

(B) 特異性引子聚合酶連鎖反應（PCR-SSP） ✅ 適用。PCR-SSP（sequence-specific primer PCR）利用針對特定等位基因設計的引子進行 PCR

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