109年:(醫檢)生化(2)
下列有關逆相高效液相層析法( Reversed-phase HPLC )的敘述,何者正確?
A流動相極性大於固定相
B極性小的樣品成分會先被沖出來
C待測物必須不溶於作為流動相的溶劑中
D化合物與固定相親和力較強,則較快被沖出來
詳細解析
本題觀念:
逆相高效液相層析法(reversed-phase high performance liquid chromatography, RP-HPLC)是目前最廣泛使用的 HPLC 分離模式(約佔所有 HPLC 方法的 75%)。其核心原則為:固定相(stationary phase)為非極性,流動相(mobile phase)為極性,利用分析物與非極性固定相的疏水性交互作用(hydrophobic interaction)進行分離。
選項分析
(A) 流動相極性大於固定相 ✅(正確答案) RP-HPLC 的特徵:
- 固定相:非極性(如 C18、C8 鍵結矽膠;octadecylsilane, ODS)
- 流動相:極性(如水、甲醇 methanol、乙腈 acetonitrile 的混合溶劑)
因此「流動相極性 > 固定相極性」,此敘述正確。(相對地,正相 HPLC,normal-phase HPLC,則相反:固定相極性 > 流動相極性)
(B) 極性小的樣品成分會先被沖出來 ❌ RP-HPLC 中,極性較大的分析物與非極性固定相親和力弱,不易被保留,較早被極性流動相沖出(retention time 短)。**極性小(疏水性強)**的分析物與非極性固定相親和力強,被保留在管柱中較長時間,**較晚被沖出
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