109年:(醫檢)檢驗(1)

關於使用分子信標( molecular beacon )檢測轉錄介導核酸擴增( transcription-mediated amplification )產物的敘述,下列何者錯誤?

A具有擴增子特異性核 苷酸的探針
B需要固相支持和洗滌程序 產生螢光訊號
C探針的兩端分別標記螢光報告基團( reporter dye )和遮蔽基團( quencher dye )
D在恆 溫下進行核酸擴增

詳細解析

本題觀念:

分子信標(molecular beacon)與轉錄介導核酸擴增(transcription-mediated amplification, TMA)的偵測原理

選項分析

(A) 具有擴增子特異性核苷酸的探針 ✅(正確陳述,非答案) 分子信標(molecular beacon)是一種單股 DNA 探針,其環狀區域(loop region,約 20–25 nt)設計為與目標擴增子(amplicon)互補,因此確實具有擴增子特異性(amplicon-specific)。只有當探針遇到互補的目標序列時,才會開環並產生螢光訊號,確保偵測的特異性。

(B) 需要固相支持和洗滌程序產生螢光訊號 ❌(錯誤陳述,即本題答案) 分子信標是在**溶液相(homogeneous/solution-phase)**中進行偵測,不需要固相支持(solid-phase support)或洗滌步驟(washing procedure)。其運作原理為:在未與目標結合時,探針兩端的莖狀互補序列(stem)將探針折疊成髮夾結構(hairpin structure),使 5' 端的螢光報告基團(reporter dye/fluorophore)與 3' 端的遮蔽基團(quencher dye)緊密相鄰,螢光被淬滅;當探針與目標序列雜交後,髮夾結構打開,re

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