107年:藥學二(第2次)
有關螢光光度測定法中所用檢品溶液濃度之敘述,下列何者正確?
A常為分光吸光度測定法檢品溶液濃度之 1/10 〜1/100
B與分光吸光度測定法中所用檢品濃度相同
C常為分光吸光度測定法檢品濃度之 10 〜100 倍
D不影響螢光光度之測定
詳細解析
本題觀念:
螢光光度測定法(fluorescence spectrophotometry)與分光吸光度測定法(UV-Vis spectrophotometry)在測定原理上根本不同:UV-Vis 是測量光被吸收後剩餘的透射光(bright background),而螢光法是在黑暗背景下直接測量樣品發出的螢光訊號。這種差異使螢光法具有遠高於 UV-Vis 的靈敏度,因此所需的樣品濃度遠低於 UV-Vis。
選項分析
(A) 常為分光吸光度測定法檢品溶液濃度之 1/10 ~1/100 這正確描述了螢光法所需的較低濃度。螢光法可在遠低的濃度下精確定量,典型上比 UV-Vis 低 1 至 2 個數量級(即 1/10~1/100),此為正確答案。
(B) 與分光吸光度測定法中所用檢品濃度相同 不正確。若兩者濃度相同,螢光法在高濃度下反而會出現**自我淬滅(self-quenching)**及 inner filter effect,造成非線性,實際上不會使用相同濃度。
(C) 常為分光吸光度測定法檢品濃度之 10 ~100 倍 方向完全相反。螢光法需要更低,而非更高的濃度。
(D) 不影響螢光光度之測定 錯誤。樣品濃度對螢光測定影響極大:濃度過高導致 inner filter effect(初級和次級濾光
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