108年:(醫檢)檢驗(2)
下圖是以 SYBR Green I 反轉錄聚合 酶連鎖反應( RT-PCR )檢測咽喉拭子中 A和B型流行感冒病毒的即時核酸放大和高分辨率熔解曲線分析結果。關於此試驗敘述,下列何者最不適當? 
A可以使用熱穩定熱 啟動 DNA 聚合 酶,增加專一性
B主要混合物包括 dUTP 及uracil N-glycosylase ,降低汙染
CSYBR Green I 在高飽和濃度下促進 PCR 反應
D0.5℃/ s 為良好的升溫速率
詳細解析
本題觀念:
本題考查以 SYBR Green I 進行反轉錄聚合酶連鎖反應(reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR)結合高分辨率熔解曲線分析(high resolution melting, HRM)偵測 A 型與 B 型流行感冒病毒(influenza virus)的原理與操作細節,重點包含 SYBR Green I 的特性、熱啟動聚合酶(hot-start DNA polymerase)、dUTP/UNG 防汙染系統,以及 HRM 升溫速率。本題為反向題(問「最不適當」)。
影像分析:
圖片為四個分析面板的組合圖,分為「對照組(上排)」與「檢體檢測結果(下排)」:
面板①(對照組 — 即時擴增曲線): 橫軸為循環次數(1–30 cycles),縱軸為螢光強度(F)。可見多條 S 型擴增曲線,不同顏色分別代表不同基因標的(橙色:A 型 Matrix 基因;粉紅色:A 型 NS1 基因;紅色:A 型 H1 基因;黑色:A 型 HA3 基因;綠色:B 型 HA 基因),且各曲線擴增效率及閾值循環(Ct)不同。黑色曲線(A 型 HA3 基因)幾乎未見擴增,提示對照中無 H3N2 成分。
面板②(對照組 — 高分辨率熔解曲線): 橫軸為溫度(T,約 65–90°C),縱軸為螢光負
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