108年:(醫檢)檢驗(2)

DNA 是分子檢測中的重要檢體之一,關於臨床 DNA 樣本的收集與保存的敘述,下列何者錯誤?

ADNA 保存於二次去離子水中最不易發生降解
BDNA 應溶於微鹼性的溶劑
C為維持 DNA 的穩定性,最好保存於- 70℃ 或更低的溫度
DDNA 水解 酶的污染會導致 DNA 的降解

詳細解析

本題觀念:

本題為反向題,考 DNA 樣本的正確保存方式,要找出錯誤的敘述。核心知識點包括:DNA 的化學穩定性、溶劑對 DNA 降解的影響、保存溫度與緩衝液選擇。

選項分析

(A) DNA 保存於二次去離子水中最不易發生降解 ❌(此為錯誤陳述,即本題答案) 二次去離子水(double deionized water)雖可減少金屬離子汙染,但:

  1. 缺乏緩衝能力:純水吸收空氣中的 CO2\text{CO}_2 後形成碳酸,使 pH 下降(偏酸性),酸性環境會促進 DNA 水解(depurination,去嘌呤反應)
  2. 無 DNase 抑制:不含 EDTA,無法螯合 Mg2+\text{Mg}^{2+} 等二價陽離子,DNase 可保持活性
  3. 實際研究:DNA 保存於水中,在 2–8°C 時明顯降解,即使 -20°C 也比 TE 緩衝液穩定性差 → 正確保存應使用 TE 緩衝液(10 mM Tris-HCl + 1 mM EDTA, pH 8.0),而非去離子水

(B) DNA 應溶於微鹼性的溶劑 ✅(正確陳述) 標準 TE 緩衝液 pH 8.0(微鹼性),此 pH 值可:

  • 減少 DNA 的酸性水解(去嘌呤反應在酸性環境加速)
  • EDTA 在 pH 8.0 時有效螯合二價金屬離子,抑制 D

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