108年:(醫檢)生化(2)
利用 Kjeldahl method 定量蛋白質,下列敘述何者正確?
A利用 鹼性分解蛋白質
B利用 產生的 Ammonium ion 來定量
C換算時須把含 氮量除以 6.25
D血中 Urea 不會干擾結果
詳細解析
本題觀念:
Kjeldahl 法(Kjeldahl method)是定量樣品中有機氮含量,再換算為蛋白質含量的經典方法,分為三個主要步驟:酸性消化(digestion)、蒸餾(distillation)與滴定(titration)。
選項分析
(A) 利用鹼性分解蛋白質 錯誤。Kjeldahl 法的消化步驟是利用濃硫酸()在高溫(360–410°C)下進行氧化分解,將有機氮轉化為硫酸銨()。此步驟是強酸性環境,而非鹼性。鹼(NaOH)僅在後續蒸餾步驟中用於將銨離子轉化為揮發性氨氣,並非用來分解蛋白質。
(B) 利用產生的 Ammonium ion 來定量 正確。消化完成後,加入過量 NaOH 使 轉化為 揮發,再蒸餾收集至硼酸或標準酸液中,以滴定法(titration)測定氨量,即等同於測定銨離子(ammonium ion)的量,進而計算含氮量,換算為蛋白質。
(C) 換算時須把含氮量除以 6.25 錯誤。換算公式是「含氮量乘以 6.25」得到蛋白質量。因為大多數蛋白質含氮量約為 16%,故:
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