利⽤增幅阻礙突變系統（ Amplification refractory mutation system ）偵測 single nucleotide polymorphism（SNP ）時，需將欲分析之 SNP 設計於引⼦的何處？

本題觀念：

增幅阻礙突變系統（Amplification Refractory Mutation System, ARMS），又稱等位基因專一性 PCR（allele-specific PCR, AS-PCR），是偵測單核苷酸多型性（single nucleotide polymorphism, SNP）的重要分子診斷技術。其核心原理依賴引子（primer）3' 端最後一個核苷酸的配對特異性。

選項分析

(A) 5' 端第一個核苷酸 — 錯誤。引子 5' 端的序列雖影響 $T_m$ 值，但 DNA 聚合酶（DNA polymerase）的延伸方向為 5'→3'，5' 端錯誤配對不影響延伸的啟動，故不能用於等位基因辨別。

(B) 3' 端最後一個核苷酸 — 正確。Taq DNA 聚合酶缺乏 3'→5' 校對活性（proofreading activity），因此若引子 3' 端最後一個核苷酸與模板不配對，延伸效率極低甚至無法啟動。ARMS 的設計正是將欲偵測的 SNP 位點置於引子的 3' 端，若模板序列與該等位基因相符，即可有效擴增；若不符，則無擴增產物。

(C) 中間位置 — 錯誤。引子中間位置的單一錯誤配對通常不足以完全抑制 PCR 延伸，因此無法有效區分不同等位基因。

(D) 任意位置皆可 — 錯誤。位置至關重要，只有

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