108年:(醫檢)檢驗(1)

使⽤ reverse dot blot SSOP (Sequence-specific oligonucleotide probe )的⽅法做 HLA 分型,下列何者被固定在膜上?

A探針( Probe )
BPCR 擴增產物
C引⼦( Primer )
D合成的 HLA 分⼦( Recombinant HLA )

詳細解析

本題觀念:

HLA 分型的分子方法中,序列特異性寡核苷酸探針法(sequence-specific oligonucleotide probe, SSOP) 有兩種基本格式,差異在於探針(probe)與 PCR 擴增產物(amplicon)哪個被固定於膜上:

  • 正向 dot blot(Forward SSOP):PCR 產物固定在膜上,探針在溶液中進行雜交
  • 逆向 dot blot(Reverse dot blot SSOP)探針固定在膜上,標記的 PCR 產物在溶液中與膜上探針雜交

選項分析

(A) 探針(Probe)✅(正確答案) Reverse dot blot SSOP 的定義性特徵:序列特異性寡核苷酸探針(SSO probes)被固定(immobilize)在尼龍膜(nylon membrane)或硝化纖維膜(nitrocellulose membrane)上。標記的 PCR 擴增產物(以生物素 biotin 標記)在溶液中與固定的探針進行雜交,再以化學發光或比色法偵測訊號。每條膜上可排列多種不同特異性的探針,一次判讀多個等位基因。

(B) PCR 擴增產物 PCR 擴增產物在 reverse dot blot 中是在溶液中游離的標記分子,並非固定在膜上。將 PCR 產物固定在膜上是「正向

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