108年:(醫檢)免疫病毒(1)
如果⼀個檢體中含有兩種以上的病毒,可⽤下列何種⽅法分別純化出個別的病毒?
A將檢體接種於⼩鼠
B溶斑定量法( plaque formation assay )
C將檢體接種於雞胚胎蛋之⽺膜腔
D電⼦顯微鏡觀察、分離
詳細解析
本題觀念:
當一個檢體含有兩種以上的病毒時,如何分別純化出個別的病毒是病毒學實驗的重要技術。溶斑定量法(plaque formation assay / plaque purification)是分離純化個別病毒株的金標準方法,藉由單一病毒顆粒形成獨立的溶斑(plaque),再挑取單一溶斑繁殖,即可獲得基因均一的純系病毒株(clonal virus stock)。
選項分析
(A) 將檢體接種於小鼠 ❌ 錯誤 接種動物(如小鼠)雖然可以讓某些病毒複製增殖,但無法「分別純化出個別的病毒」。動物體內的免疫環境複雜,且無法控制哪種病毒優先複製,更無法在混合感染的動物體內分離出單一純種病毒。此方法用於某些特殊病毒的初代分離(如狂犬病毒、蟲媒病毒),而非病毒純化分離。
(B) 溶斑定量法(plaque formation assay)✅ 正確(本題答案) 溶斑定量法(又稱 plaque assay)是利用病毒感染單層細胞(monolayer cells)後,在半固體覆蓋層(如瓊脂或甲基纖維素)限制病毒擴散的情況下,單一病毒顆粒只能感染相鄰細胞,最終形成局部的裂解病灶(溶斑)。每個溶斑理論上源自單一病毒顆粒。溶斑純化(plaque purification):從溶斑區域以巴斯德吸管挑取病毒,再次接種擴增,重複 2~3 次即可獲得基因純
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