107年:(醫檢)檢驗(2)

下列何種方法可用於檢測兩個蛋白質之間的結合?

AChromatin immunoprecipitation
BYeast two-hybrid assay
CFluorescence in situ hybridization
DcDNA microarray

詳細解析

本題觀念:

偵測兩個蛋白質之間是否存在**直接結合互動(protein-protein interaction, PPI)**是分子生物學研究的重要課題。各種方法有其適用範圍:酵母雙雜交系統(yeast two-hybrid assay, Y2H)是目前最廣泛用於偵測兩個特定蛋白質是否直接交互作用的技術。

選項分析

(A) Chromatin immunoprecipitation(染色質免疫沉澱,ChIP) ChIP 用於偵測蛋白質與 DNA 之間的結合,例如轉錄因子或組蛋白修飾酵素結合在基因組特定位置。它不適合用來偵測蛋白質與蛋白質之間的直接結合,故此選項錯誤。

(B) Yeast two-hybrid assay(正確答案) 酵母雙雜交(Y2H)是偵測蛋白質-蛋白質交互作用的經典方法。原理:

  1. 將轉錄因子 Gal4 分拆為 DNA 結合域(DNA-binding domain, DBD)和轉錄活化域(activation domain, AD)
  2. 將「誘餌蛋白(bait protein)」融合到 DBD(→ DBD-bait fusion)
  3. 將「獵物蛋白(prey protein)」融合到 AD(→ AD-prey fusion)
  4. 若兩者發生交互作用,DBD 和 AD 被拉近,重新組成功能

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