107年:(醫檢)檢驗(2)
下列何種實驗條件最能增加特異性寡核 苷酸試紙(Sequence-specific oligonucleotide strip )應用於 HLA 分型法的鑑別度( Resolution )?
A增加此試驗方法使用的探針( Probe )數目
B增加此試驗方法使用的引子( Primer )數目
C降低反應緩衝液所含的鹽類濃度
D增加反應時的孵育溫度
詳細解析
本題觀念:
特異性寡核苷酸試紙(Sequence-Specific Oligonucleotide strip, SSO strip)應用於 HLA 分型法的鑑別度(Resolution)影響因素,以及提升解析度的方法。
選項分析
(A) 增加此試驗方法使用的探針(Probe)數目 此選項正確。SSO 分型法的核心原理是讓已知序列的寡核苷酸探針與擴增後的樣本 DNA 雜交(hybridization),透過陽性/陰性雜交結果的組合推斷 HLA 等位基因型。每條探針對應一個特定的 HLA 多型性位點,探針數目越多,能覆蓋的多型性位點越多,鑑別度(分辨不同等位基因的能力)也越高。研究顯示,使用更多探針的套組(如 LabType XR 對比 HD 版本)可降低等位基因模糊(allele ambiguity)的中位比例約 26.1%。
(B) 增加此試驗方法使用的引子(Primer)數目 此選項不正確。在 SSO 分型法中,引子的作用是先以 PCR 擴增出目標 HLA 基因片段,增加引子數目僅能擴增更多的基因座(locus),而不能直接提升對已擴增區域的鑑別度。鑑別度的關鍵在於後續雜交步驟所使用的探針多樣性,而非引子數目。引子數目是 SSP-PCR 法提升解析度的關鍵(因為 SSP-PCR 以引子特異性判
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