利用 biuret method 定量蛋白質時，需要下列那一種離子？

本題觀念：

Biuret method（雙縮脲法）是臨床化學中用於定量血清總蛋白質的標準方法，其原理基於 $\text{Cu}^{2+}$（銅離子）在鹼性條件下與肽鍵形成紫色螯合物。

選項分析

(A) $\text{Ca}^{2+}$（鈣離子） 鈣離子不參與 biuret 反應的顯色機制。雖然鈣離子在臨床上極為重要，但與蛋白質肽鍵的螯合無關。

(B) $\text{Cu}^{2+}$（銅離子） 正確答案。Biuret 試劑的主要成分為硫酸銅（$\text{CuSO}_4$），提供 $\text{Cu}^{2+}$。在鹼性環境（NaOH）中，$\text{Cu}^{2+}$ 與蛋白質中的肽鍵氮原子形成三齒或四齒螯合複合物，產生特徵性的紫色（mauve-violet color），吸光值在 540 nm 達到最大值。顏色深淺與肽鍵數目成正比，進而可定量蛋白質濃度（Beer–Lambert law）。

(C) $\text{Mg}^{2+}$（鎂離子） 鎂離子不參與 biuret 反應。$\text{Mg}^{2+}$ 是多種酶的輔因子，但與蛋白質顯色定量無關。

(D) $\text{Zn}^{2+}$（鋅離子） 鋅離子不參與 biuret 反應。$\text{Zn}^{2+}$ 是許多金屬酶的活性中心（如碳酸酐酶），但不用於此法

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