107年:(醫檢)生化(2)
下列何種受質可以經由鹼性磷酯 酶水解作用產生螢光?
Aadamantyl 1,2-dioxetane aryl phosphate
Bumbelliferone phosphate
Cp-nitrophenyl phosphate
Dcreatine phosphate
詳細解析
本題觀念:
鹼性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)可使用多種受質,依檢測訊號分為三大類:比色法(colorimetric)、螢光法(fluorometric)、化學冷光法(chemiluminescent)。本題考察哪種受質經 ALP 水解後會**產生螢光(fluorescence)**訊號。
選項分析
(A) adamantyl 1,2-dioxetane aryl phosphate 此類受質(代表物為 AMPPD)經 ALP 去磷酸化後,產生不穩定的 dioxetane 中間體,分解時釋放化學冷光(chemiluminescence),發光波長約 477 nm,為超靈敏發光基質,不是螢光。
(B) umbelliferone phosphate Umbelliferone(7-羥基香豆素)的磷酸酯形式(代表物:4-methylumbelliferyl phosphate, 4-MUP)是 ALP 的螢光底物。ALP 水解磷酸酯鍵後釋放出 4-methylumbelliferone(4-MU),在鹼性環境下呈現強烈螢光(激發波長 Ex ≈ 360 nm,發射波長 Em ≈ 440 nm)。此選項正確產生螢光。
*(C) p-nitrophenyl phosphate(pNPP)
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