即時聚合 酶連鎖反應（ Real-time PCR ）所使用的 DNA 聚合 酶具有下列何種酵素活性，可以將 TaqMan 核酸探針分解而發出螢光？

本題觀念：

本題考核即時聚合酶連鎖反應（real-time PCR）中 TaqMan 核酸探針的水解機制，以及負責分解探針的酵素活性類型。

選項分析

(A) 5'→3' 外切酶（Exonuclease）：Taq DNA 聚合酶（Taq DNA polymerase）具有 5'→3' 外切酶活性。在 PCR 延伸過程中，當聚合酶沿模板 5'→3' 方向合成新股時，遭遇已雜交（hybridize）於模板上的 TaqMan 探針，其 5'→3' 外切酶活性會將探針從 5' 端逐步切除，使報導螢光基（reporter）脫離抑制螢光基（quencher），螢光訊號釋放。✅ 正確答案

(B) 3'→5' 外切酶（Exonuclease）：3'→5' 外切酶活性通常用於校讀（proofreading），從 3' 端切除錯誤鹼基。Taq DNA 聚合酶不具有 3'→5' 外切酶校讀活性，更重要的是，此方向無法分解結合在模板上的 TaqMan 探針。❌ 錯誤

(C) 5'→3' 內切酶（Endonuclease）：內切酶（endonuclease）從核酸鏈內部切割，不是從端點切割。TaqMan 探針的降解機制是由端點（5' 端）開始切割，屬外切酶活性，而非內切酶。❌ 錯誤

(D) 3'→5' 內切酶（Endonuclease）：同上，

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