107年:(醫檢)生化(1)
下列測定蛋白質濃度的方法,何者具有最佳的靈敏度?
A280 nm absorption
BLowry
Crefractometry
Dturbidimetry
詳細解析
本題觀念:
本題考核測定蛋白質濃度常用方法的靈敏度(sensitivity)比較。醫事檢驗師需熟悉各種蛋白質定量方法的原理、偵測範圍及靈敏度排序。
選項分析
(A) 280 nm absorption(UV 吸光法) ❌ 靈敏度最低。280 nm 吸光法利用蛋白質中含苯環的胺基酸(主要是酪胺酸 tyrosine 和色胺酸 tryptophan)對 280 nm 紫外光的吸收來定量蛋白質。此法簡便快速且不破壞樣品,但靈敏度最低,偵測範圍約 0.1–2.0 mg/mL,不適合低濃度蛋白質的測定。干擾因素:核酸(DNA/RNA)在 260 nm 也有強烈吸收,會干擾結果。
(B) Lowry(法林試劑法,Lowry protein assay) ✅ 正確答案(靈敏度最佳)。 Lowry 法結合了雙醋酸銅試劑(biuret reaction,測定胜肽鍵)和 Folin-Ciocalteu 試劑(與酪胺酸、色胺酸及銅-蛋白複合物反應),產生深藍色呈色,在 750 nm 比色。其靈敏度約為 5–100 µg/mL,比 280 nm 吸光法高出近 100 倍,是本題四個選項中靈敏度最高者。
(C) Refractometry(折射計法) ❌ 靈敏度低。折射計法測量溶液折射率(refractive index)的改變,可換算為蛋白質濃
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