106年:(醫檢)檢驗(2)
利用化學方法合成寡核 苷酸,下列敘述何者正確?
A核苷酸加入的方向是 5' 到3' 端
B需要 DNA polymerase 的作用
C可應用於 site-directed mutagenesis
D無法以螢光物質標示
詳細解析
本題觀念:
化學方法合成寡核苷酸(oligonucleotide chemical synthesis)是利用磷醯胺鹽(phosphoramidite)固相合成法,在不需要酵素的情況下,以人工方式逐一加入核苷酸單元。其方向、應用及標示能力與酵素法有根本差異。
選項分析
(A) 核苷酸加入的方向是 5' 到 3' 端 此選項錯誤。化學合成法的核苷酸加入方向是從 3' 到 5',與生物酵素合成(5'→3')相反。在磷醯胺鹽法中,合成是從固相支撐物(solid support)連接的 3' 端核苷酸開始,依序向 5' 端延伸。
(B) 需要 DNA polymerase 的作用 此選項錯誤。化學合成法的最大特點之一,正是不需要任何酵素(包括 DNA polymerase)。它使用化學試劑(如磷醯胺鹽)進行逐步偶聯(coupling)反應,所有步驟都在有機化學條件下進行,屬於無酵素合成。
(C) 可應用於 site-directed mutagenesis 此選項正確。合成寡核苷酸的重要應用之一,就是定點突變(site-directed mutagenesis)。研究者可以設計含有特定突變序列的寡核苷酸(如單一鹼基替換),用於將特定突變引入目標基因,以研究蛋白質功能。許多商業試劑公司(如 IDT、Sig
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