利用耐高溫的連接 酶連結兩段與目標核酸序列配對的寡核酸片段，藉以分析單一核 苷酸突變的技術，為下列何者？

本題觀念：

本題考核各種核酸擴增技術的原理，重點在於哪一種技術「利用耐高溫的連接酶（thermostable ligase）」將兩段寡核苷酸探針連結，藉此分析單一核苷酸突變（single nucleotide mutation / SNP）。

選項分析

(A) 聚合酶連鎖反應（Polymerase chain reaction, PCR） PCR 利用**耐高溫 DNA 聚合酶（如 Taq polymerase）**進行 DNA 合成延伸（extension），並非連接酶連結反應。PCR 可擴增任意 DNA 片段，本身不依靠連接酶，且對單一鹼基差異的辨別力相對有限（需要特殊設計，如 ARMS-PCR）。

(B) 連接酶連鎖反應（Ligase chain reaction, LCR） ✅ 正確 LCR 使用耐高溫 DNA 連接酶（如 Taq ligase 或 Ampligase），針對每條目標 DNA 鏈設計兩段相鄰寡核苷酸探針（oligonucleotide probes）：

• 兩探針的末端在目標序列上緊鄰相接（adjacent），由連接酶在兩探針之間形成磷酸二酯鍵，完成連結。
• 關鍵機制：連接酶只有在探針-模板完全配對（即連結位點無任何錯配）時才能有效連結。若目標位點存在單一核苷酸突變，則探針末端發生鹼基錯配

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