106年:(醫檢)檢驗(2)
承上題【大約 20% 的A型血友病患者，其凝血因子基因在細胞進行減數分裂時發生同源互換（ Homologous recombination ）而產生下列何種變異？】，下列何種分子診斷技術最適合用來偵測此種變異？
A變性高效能液相層析分析（ dHPLC ）
B長片段聚合 酶連鎖反應（ Long-distance PCR ）
C北方墨點法（ Northern blot ）
D即時 PCR （Real-time PCR ）
詳細解析
本題觀念：
本題承接上題，確認A型血友病（Hemophilia A）因FVIII基因同源互換產生**基因反轉（gene inversion）**後，詢問最適合偵測此種大型結構性變異（large structural variant）的分子診斷技術。偵測基因反轉的挑戰在於：反轉片段巨大（第22內含子反轉涉及186 kb 的 0.6 Mb片段；第1內含子反轉涉及140 kb），常規PCR無法跨越這麼長的片段進行擴增。
選項分析
(A) 變性高效能液相層析分析（dHPLC, Denaturing High-Performance Liquid Chromatography） dHPLC 用於偵測**點突變（point mutations）**和小型插入/缺失（small indels）。其原理是PCR產物在部分變性條件下形成異源雙鏈（heteroduplex），在層析管柱中分離異源雙鏈與同源雙鏈，藉此發現序列差異。dHPLC適合掃描數百鹼基的小片段，無法偵測大型基因反轉（因反轉不會產生異源雙鏈信號）。
(B) 長片段聚合酶連鎖反應（Long-distance PCR, LD-PCR） ✅ 正確答案 LD-PCR是一種改良的PCR技術，使用特化的熱穩定聚合酶（如含校正活性的混合酶）和優化的循環條件，能擴增長達20–30 kb的DN
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