106年:(醫檢)微生(2)

有關脈衝式電泳分析( pulsed-field gel electrophoresis )的敘述,下列何者正確?

A對不同細菌菌種,所使用的限制 酶(restriction endonucleases )均要相同
B電泳主要分析 DNA 片段範圍在 10 kb 以下
C電泳分析前,需以 PCR 增幅所萃取的 DNA
D電泳分析後,即可用於細菌分型

詳細解析

本題觀念:

本題考脈衝式電泳分析(pulsed-field gel electrophoresis, PFGE)的原理與應用。PFGE 是細菌分子分型(molecular typing)的黃金標準,直接對細菌整條染色體 DNA 進行限制酶消化後,以交替電場進行大片段 DNA 分離,無需 PCR 增幅。

選項分析

(A) 對不同細菌菌種,所使用的限制酶均要相同 此選項錯誤。不同細菌菌種的基因組 GC 含量和限制位點分布不同,需針對各菌種選用合適的稀切限制酶(rare-cutting restriction endonucleases)。例如,分析 Staphylococcus aureus 常用 SmaI,分析 Escherichia coli O157 則常用 XbaI,並非全菌種統一使用同一酶。使用不同限制酶是 PFGE 分型成功的關鍵。

(B) 電泳主要分析 DNA 片段範圍在 10 kb 以下 此選項錯誤。PFGE 的優勢正是能分離一般瓊脂糖凝膠電泳無法處理的超大型 DNA 片段。PFGE 可解析的 DNA 片段大小範圍約為 10 kb 至 10 Mb(百萬鹼基對),典型的 PFGE 圖譜顯示 5–20 條介於 10–800 kb 的條帶。此選項顛倒了傳統電泳與 PFGE 的適用範圍。

**(C) 電泳分

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