下列那一個方法不適用於脂蛋白元 E（apo E ）的基因型鑑定？

本題觀念：

本題考脂蛋白元 E（apolipoprotein E, apo E）的**基因型鑑定（genotyping）**方法。題目問哪個方法「不適用於」apo E 的基因型鑑定，即找出無法在 DNA 層次確認 apo E 基因型（ε2/ε3/ε4 等位基因）的方法。

選項分析

(A) restriction isotyping with the enzyme HhaI（限制酶 HhaI 分型法） 這是 apo E 基因型鑑定的經典方法（gold standard）。操作步驟：PCR 擴增 apo E 基因中含 codon 112 和 158 的片段 → 以限制酶 HhaI（識別序列 GCG↓C）消化 → 聚丙烯醯胺膠電泳分析片段大小。HhaI 的切割位點取決於 apo E 第 112 和 158 胺基酸位置的密碼子是否為 Arg（GCGC，HhaI 可切）或 Cys（GTGC，HhaI 不切），因此不同組合的 ε2/ε3/ε4 等位基因產生特定的片段圖譜。此方法可以進行 apo E 基因型鑑定。

(B) amplification refractory mutation system（ARMS，擴增受阻突變系統） ARMS（又稱 allele-specific PCR）的原理：設計等位基因特異性引子，3' 端最後一個鹼基對應特

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