106年:(醫檢)生化(2)

使用高效能液相層析儀進行定量分析時,下列何者可以用來計算待測物含量?

A管柱的溫度
B波峰的面積
C移動相的流速
D波峰的遲滯時間

詳細解析

本題觀念:

高效能液相層析儀(high performance liquid chromatography, HPLC)進行定量分析時,所依據的訊號參數。需區分「定性(識別化合物)」與「定量(計算含量)」所用的不同參數。

選項分析

(A) 管柱的溫度 — 不正確 管柱溫度影響分析物的分離效率和保留時間,用於優化分離條件,但無法直接用來計算待測物含量。溫度屬於儀器操作參數,非定量依據。

(B) 波峰的面積正確答案 波峰面積(peak area)是偵測器訊號對時間的積分值,與通過偵測器的分析物總量(mol 數或質量)成正比。建立標準曲線(校正曲線)後,即可由未知樣品的波峰面積換算出待測物濃度。這是 HPLC 定量分析最常用、最可靠的參數。

(C) 移動相的流速 — 不正確 移動相流速影響分析物的遷移速度和分離效果,可改變峰高與峰形,但本身不能用來計算待測物含量,屬於操作條件設定參數。

(D) 波峰的遲滯時間 — 不正確 波峰的遲滯時間(retention time, tRt_R)是用於**定性分析(化合物識別)**的參數 — 藉由比對已知標準品的 tRt_R 來確認待測物的身份。tRt_R 可協助辨別「是什麼」,但無法單獨用來計算「有多少」。

答案解析

答案為 (B) 波峰的面積

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