使用螢光顯微鏡觀察 FITC 標記的螢光時，所用的激發光源波長（ nm ）應為何？

本題觀念：

FITC（fluorescein isothiocyanate，異硫氰酸螢光素）是螢光顯微鏡與流式細胞儀最常用的螢光染料之一。要使螢光物質發光，必須以「激發光（excitation light）」照射，使螢光分子吸收能量後躍遷至激發態，再以「發射光（emission light）」的形式釋放能量。不同螢光素的激發/發射波長各異，是實驗設計中的關鍵參數。

選項分析

(A) 220 nm — 屬於深紫外線（UV-C）範圍，遠超出 FITC 的激發峰值，並非 FITC 的激發波長。

(B) 313 nm — 屬於中紫外線（UV-B）範圍，仍遠低於 FITC 的激發峰值，不適合激發 FITC。

(C) 490 nm — FITC 的激發最大值（excitation maximum）約為 490–495 nm，發射最大值（emission maximum）約為 516–519 nm，呈綠色螢光。市面上常用的 488 nm 氬離子雷射光源即與此高度吻合。此選項正確。

(D) 540 nm — 540 nm 接近 FITC 的發射波長範圍（emission），而非激發波長；以此光源照射無法有效激發 FITC。

答案解析

FITC 的激發最大值約 490–495 nm，與選項 (C) 490 nm 最接近。螢光顯

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