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115年:(醫檢)微生(2)

有關細菌藥敏試驗的敘述，下列何者最不適當？

A臺灣目前主要依據美國CLSI 所制定的標準
B常用的紙錠擴散法屬於半定量法
C一般紙錠擴散法建議的濁度為0.5 McFarland standard
D綠膿桿菌接種後須在含有二氧化碳的溫箱培養

詳細解析

本題觀念

細菌藥物敏感性試驗（antimicrobial susceptibility testing, AST）是臨床微生物實驗室的核心業務之一，其操作規範直接影響抗生素處方的正確性。本題考核紙錠擴散法（disk diffusion）的標準操作條件，包括參考標準、方法學分類、菌液濁度及培養環境。考生需特別注意不同菌種對培養氣體環境的要求差異，才能辨識出不適當的敘述。

選項分析

A. 臺灣目前主要依據美國 CLSI 所制定的標準 此敘述正確。臺灣各醫療院所的臨床微生物實驗室主要依循美國 CLSI（Clinical and Laboratory Standards Institute）發布的 M100 與 M02 等文件，作為抗菌藥物敏感性試驗的方法學與判讀標準。CLSI 標準涵蓋培養基規格、操作步驟、培養條件及抑菌圈判讀基準（breakpoints），是國際間最廣泛採用的 AST 參考體系之一。

B. 常用的紙錠擴散法屬於半定量法 此敘述正確。紙錠擴散法（Kirby-Bauer 法）透過量測抑菌圈直徑，將結果對照 CLSI 提供的判讀標準，歸入感性（susceptible）、中間（intermediate）或抗性（resistant）三個等級。雖然抑菌圈大小與最低抑菌濃度（MIC）具有相關性，但此方法並不直接給出精確的 MIC 數值，因此被歸類為半定量法，有別於液態微量稀釋法（broth microdilution）等定量方法。

C. 一般紙錠擴散法建議的濁度為 0.5 McFarland standard 此敘述正確。依據 CLSI 規範，紙錠擴散法的接種菌液濃度應調整至 0.5 McFarland 濁度標準，相當於約 1.5 x 10⁸ CFU/mL。此標準化濁度確保不同實驗室之間的結果具有可比較性與再現性。菌液濃度過低或過高都會影響抑菌圈大小，導致判讀結果偏差。

D. 綠膿桿菌接種後須在含有二氧化碳的溫箱培養 ✗ 此敘述最不適當。綠膿桿菌（Pseudomonas aeruginosa）是一種非苛養性（nonfastidious）需氧菌，依照 CLSI 標準進行紙錠擴散法時，應在 35°C 的一般大氣環境（ambient air）下培養 16-18 小時。含有 5% CO₂ 的培養環境僅適用於苛養性細菌，例如肺炎鏈球菌（Streptococcus pneumoniae）、嗜血桿菌屬（Haemophilus spp.）及奈瑟氏菌屬（Neisseria spp.）。若對非苛養菌使用 CO₂ 培養，二氧化碳會改變 Mueller-Hinton 瓊脂的 pH 值，進而影響抑菌圈大小，產生不正確的藥敏結果。

答案解析

正確答案為 D。綠膿桿菌是非苛養性好氧菌，其藥敏試驗依 CLSI 規定必須在一般大氣環境下培養，而非含有二氧化碳的培養箱。CO₂ 環境會影響 Mueller-Hinton 瓊脂的酸鹼值，造成抑菌圈直徑改變，使判讀結果失準。CO₂ 培養僅保留給需要額外氣體條件才能生長的苛養性菌種，本題其餘三個選項（A、B、C）的敘述均符合 CLSI 標準規範，屬於正確敘述。

核心知識點

  • 臺灣 AST 主要依據 CLSI M100/M02 標準
  • 紙錠擴散法為半定量法，量測抑菌圈直徑並對照 breakpoints 判讀
  • 標準接種菌液濃度為 0.5 McFarland（約 1.5 x 10⁸ CFU/mL）
  • 非苛養菌（含綠膿桿菌）於 35°C 一般大氣下培養；苛養菌才需 5% CO₂
  • CO₂ 會改變 Mueller-Hinton 瓊脂 pH，影響非苛養菌藥敏試驗結果的準確性

參考資料

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