流式細胞儀操作中，下列敘述何者錯誤？
詳細解析
本題觀念
流式細胞儀（flow cytometer）讓細胞逐一通過雷射光束，再依光散射與螢光訊號分析細胞。前向散射（forward scatter, FSC）通常反映細胞大小，側向散射（side scatter, SSC）主要反映細胞內部複雜度與顆粒性；螢光通道則用來偵測染料或抗體標記的目標。先分清楚這三類訊號，就能判斷哪個敘述錯誤。
選項分析
A. 與 488 nm 雷射光垂直方向收集的訊號屬於側向散射，主要提供細胞內部顆粒性、胞器及結構複雜度的資訊。細胞大小的粗略指標通常來自沿雷射前進方向收集的前向散射，因此不能把側向散射當成細胞大小測量。此項敘述正確。
B. 不同螢光染料的放射光譜可能重疊。例如紅色與綠色螢光即使分別安排在不同偵測通道，仍可能有部分訊號落入另一通道，形成光譜溢出。實際分析時需要以單色對照進行螢光補償，或在適當情況下進行光譜拆分，才能較準確估計各標記的訊號。此項敘述正確。
C. 細胞沒有螢光染色時，仍會使雷射光產生前向散射與側向散射。側向散射可用來估計細胞內部複雜度或顆粒性，不以螢光染色為必要條件；未染色細胞也可以建立散射圖，並作為後續螢光分析的基礎。把「沒有染色」等同於「無法看出顆粒密度」是錯誤的，因此本項是答案。
D. 若目標是細胞表面分子，抗體可以直接和活細胞表面抗原結合，再進行洗滌與上機分析，不一定要先固定。固定通常在需要保存細胞形態、延後分析，或要進一步染色細胞內抗原時特別有用；是否固定仍要依抗體、細胞狀態與實驗流程決定。此項敘述正確。
答案解析
本題答案為 C。流式細胞儀的散射訊號來自細胞與雷射光的交互作用，不是來自螢光染料。FSC 多用來粗略反映細胞大小，SSC 則反映細胞內部的顆粒性與複雜度，所以未染色細胞仍可取得 SSC。螢光染色是為了辨識特定抗原或其他目標，不能把螢光訊號與散射訊號混為一談。判讀操作敘述時，應先問它描述的是散射、螢光，還是染色前處理，再檢查該功能是否真的需要螢光標記。
核心知識點
流式細胞儀常考的三組訊號可整理如下：FSC 位於雷射光前進方向，主要與細胞大小相關；SSC 大致在與雷射垂直的方向，主要與細胞內顆粒、胞器及複雜度相關；螢光訊號來自螢光染料受激發後的放射光，用來辨識表面或細胞內標的。螢光光譜重疊會造成溢出，須用補償或光譜拆分處理。表面抗原可在活細胞上進行染色；細胞內抗原則通常需要固定及通透化，讓抗體進入細胞。記住「散射可不靠染色，特異性標的才需要相應螢光標記」，即可避免本題的陷阱。