114年:(醫檢)檢驗(1)
關於可逆性中斷子定序法（reversible terminator-based sequencing）的敘述，下列何者最正確？
A正確配對的中斷子（terminator）不會發出螢光
B可逆性中斷子（reversible terminator）為雙去氧核苷酸（dideoxynucleotide）
C加入酸性溶液後，才可以繼續下一個鹼基的定序
D此法是運用乳化式增幅（emulsion amplification）原理
詳細解析
本題觀念
本題探討 Illumina 等次世代定序平台所使用的「可逆性中斷子定序法」（reversible terminator–based sequencing），其核心在於利用具有可逆阻斷基團（blocking group）的改造型 dNTP 作為暫停延伸的中斷子（terminator），並在定序反應每一週期除去螢光標記及阻斷基團，使 DNA 聚合酶得以繼續下一輪鹼基合成。
選項分析
-
選項A
「正確配對的中斷子不會發出螢光」不符事實。Illumina SBS 化學反應中，每個可逆性中斷子均帶有螢光標記，並以不同波長對應四種鹼基，以利影像辨識。在成像前，標記的 terminator 已被聚合酶加入複本，故會發出螢光信號後才辨識鹼基。(illumina.com) -
選項B
「可逆性中斷子為雙去氧核苷酸（dideoxynucleotide）」錯誤。dideoxynucleotide（ddNTP）於 Sanger 定序中不可逆地終止合成，缺乏可恢復的 3′-OH；而可逆性中斷子是以改造型 deoxyn
...（解析預覽）...