如圖為genomic DNA 經過bisulfite conversion 後，利用圖中所示探針進行 MethyLight 分析所得之擴增曲線，下列敘述何者最不適當？

本題觀念：

本題聚焦於 MethyLight（甲基化特異性實時定量 PCR）技術之原理：利用 sodium bisulfite 處理後的 DNA，將未甲基化的胞嘧啶（C）轉化為尿嘧啶（U，再於 PCR 中呈現為 T），而保留 5-methylcytosine 於 CpG 位點，使得設計含有 CpG 的探針或引子只會與甲基化序列完全互補並產生訊號，透過探針螢光強度與循環數關係判讀該位點之甲基化程度。

影像分析：

圖中呈現兩條擴增曲線，曲線 a 在第十多個循環即進入指數增幅期，螢光強度顯著上升；曲線 b 始終接近背景而無擴增。由上方標示的探針序列 “6FAM-ACCCGACCCCGAACCGCG-MGBNFQ” 可見其含有多個 CpG 位點，僅在這些胞嘧啶被甲基化、 bisulfite 處理後仍保有 “CG” 配對時，探針才能完全互補偵測，PCR 才順利進行並產生螢光。因此曲線 a 代表樣本中該區域為甲基化狀態；曲線 b 則代表該區幾乎無甲基化訊號。

選項分析

• 選項A “此區域中有 4 個 CpG 位點”：從探針序列 ACCCGACCCCGAACCGCG 中，以 C (第4位)–G(第5位)、C(第10位)–G(第11位)、C(第15位)–G(第16位)、C(第17位)–G(第18位) 等共 4 組 CpG 二核苷酸，可確定此區含 4 個 CpG，屬實。

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