油滴數位化聚合酶連鎖反應（ droplet digital PCR, ddPCR ）是藉由單分子油滴式隔離進行核酸拷貝數的絕對定量；對檢測腫瘤微量突變等位比例（ mutation allele frequency, MAF ）有極高敏感度。圖示為利用ddPCR收取16,000顆油滴，進行 A基因野生型與突變型之螢光訊號強度的分析結果，超過閾值的油滴數目以紅字標示。此突變等位比例為何？

本題觀念：

本題主要在考察 droplet digital PCR（ddPCR）的絕對定量原理，以及如何計算 mutation allele frequency（MAF），也就是用 ddPCR 分別偵測到的突變型與野生型陽性油滴數之比。

影像分析：

從左側圖「A基因突變型特異檢測」可見，以紅色標示的高螢光強度（超過閾值）油滴數為 600；黑灰色點為陰性或雨滴（rain）區域油滴。右側圖「A基因野生型特異檢測」紅色標示的陽性油滴數為 4200，其餘為未偵測或陰性油滴。題目敘述共收集了 16000 顆油滴，代表左右兩個檢測分別對同一樣本進行突變型與野生型探針偵測，並統計各自的陽性油滴數。

選項分析

計算 MAF 時，公式為： 突變等位比例（%）= 突變型陽性油滴數 ÷ (突變型陽性 + 野生型陽性油滴數) × 100% (packages.oit.ncsu.edu)

各選項套用計算結果：

• 選項A：3.8%
  計算應為 600 ÷ (600 + 4200) ≈ 12.5%，與 3.8% 相差甚遠，排除。

• 選項B：14.3%
  若為 600

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