下列何種染料最常用於染 Corynebacterium diphtheriae 之異染顆粒（ metachromatic granules ）？

本題觀念：

Corynebacterium diphtheriae 之異染顆粒（metachromatic granules，也稱 volutin granules 或 Babès–Ernst bodies）為細菌胞內聚集的高分子多磷酸鹽，能在特定染色下呈現與周圍細胞質不同的顏色。臨床檢驗中最常用的簡易方法為在 Loeffler’s 介質上培養後，以 methylene blue 染色觀察，其可快速呈現顆粒的 metachromasia 特性。

選項分析

• 選項A：toluidine blue
  Albert’s stain（或稱 polychrome methylene blue）雖常以 toluidine blue ＋ malachite green 配成 A 溶液，再以碘液或複合染劑固色，可將顆粒染成暗紫色、細胞質呈綠色(universe84a.com)，但此為較複雜之複合染劑，不是最常用的單一染料。

• 選項B：crystal violet
  Crystal violet 為 Gram 染色之初染劑，同時也可作為 Neisser 法的對比色素之一，但它並非專用於突顯多磷酸顆粒，顆粒本身不會因純粹的 crystal violet 而顯著 metachromasia。

• 選項C：lactophenol cotton blue
  主要用於真菌絲或酵母菌的顯微觀察染色，不具備顆粒 metachromasia 功能，與 Corynebacterium diphtheriae 顆粒染色無關。

• 選項D：methylene blue
  在 Loeffler’s 介質上培養後，以 Loeffler’s methylene blue 染劑直接抹片，細胞質呈淡藍，metachromatic granules 則顯示為深藍或紅紫色（metachromasia）(biocyclopedia.com)。由於操作簡便、敏感度高，為最常用之染料。

答案解析

C. diphtheriae 的快速鏡檢通常採用 Loeffler’s methylene blue 染色法。此法在含血清之 Loeffler’s 斜面培養後取材，直接以 methylene blue 染色，不需複雜的複合染劑，能在短時間內清楚顯示細胞末端或極區的 metachromatic granules，其深藍或紅紫色顆粒對比周遭淡藍的細胞質，具有快速、敏感、簡便的優點，因此在臨床微生物學實驗室中最常被使用。

核心知識點

• Metachromatic granules（Volutin/Babès–Ernst bodies）成分：多聚磷酸鹽（polyphosphate）
• 染色原理：metachromasia，多聚磷酸鹽顆粒與基本染料作用後顯示與染料原色不同的顏色
• 染色技術：
  • Loeffler’s methylene blue（最常用，顆粒深藍/紅紫 vs 細胞質淺藍）
  • Albert’s stain（polychrome methylene blue，含 toluidine blue + malachite green）
  • Neisser stain（primary 為酸化 methylene blue，再以 chrysoidine 或 crystal violet 對染）
• 診斷要點：C. diphtheriae culture on Loeffler’s medium + methylene blue smear → 中極或末端可見 metachromatic granules

臨床重要性

快速鏡檢發現 metachromatic granules 能在抗毒素及抗生素治療前，於數小時內提供強烈的臨床診斷線索，對 diphtheria 之即時隔離與處置極具關鍵價值。