113年:(醫檢)檢驗(2)
利用解離曲線分析法(melting curve analysis)進行單一核苷酸多型性(single nucleotide polymorphism, SNP)的檢測;下圖中的何種曲線是C/T異型合子(heterozygote)樣本的檢驗結果?
A僅A、B曲線
B僅B、C曲線
C僅A、C曲線
DA、B、C曲線
詳細解析
本題觀念
利用高解析度 melting curve analysis 區別 SNP 基因型。單一核苷酸多型性(SNP)在 PCR 放大產物中,若為異型合子(heterozygote),產物中會同時形成兩種 perfect‐match homoduplex 與兩種 mismatch heteroduplex。這四種雙股體的解離(melting)溫度(Tm)各有差異,且對稱 SNP 的兩種 homoduplex 因序列相互對應,Tm 常重疊;兩種 heteroduplex 因 mismatch 類型不同,會呈現兩個較低的 Tm。故異型合子的 melting curve derivative 圖上會出現三個 distinct peaks 對應三種獨立的解離事件(兩 heteroduplex + 一 homoduplex )。
影像分析
圖中繪出螢光強度隨溫度上升的解離曲線,代表三種不同 duplex 類型的 melting behavior:
- 紅色曲線 A(Tm 約 89℃):代表 perfect‐match homoduplex(C/C 或 T/T 同型合子)中較穩定者,3‐H bond 多,Tm 最高。
- 黃色曲線 B(Tm 約 87℃):代表其中一種 mismatch heteroduplex,因單一 mismatch 穩定度略降,Tm
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