114年:醫學一(1)
DNA足跡鑑定( DNA footprinting assay )最適用於下列何種分析?
A一段基因編碼區的 5'端以及3'端的位置
B基因組中會與調控 RNA結合的位置
CDNA與蛋白質發生專一性結合的位置
D被剪接的內含子( intron)在前信使 RNA(pro-mRNA)中的位置
詳細解析
本題觀念:
DNA足跡鑑定(DNA footprinting assay) 是一種分子生物學技術,主要用於測定 DNA結合蛋白(DNA-binding proteins) 在 DNA 分子上的專一性結合序列位置。
其核心原理是利用酵素(如 DNase I)或化學試劑對 DNA 進行隨機切割。當某個特定的蛋白質(如轉錄因子)結合在 DNA 的特定序列上時,該蛋白質會「保護」這段 DNA 免受酵素切割。在電泳膠片(如聚丙烯醯胺凝膠 PAGE)上,未結合蛋白質的對照組會呈現連續的條帶(ladder),而結合蛋白質的實驗組則會在結合位置出現條帶缺失的區域,形成所謂的「足跡(footprint)」。
選項分析
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A. 一段基因編碼區的 5'端以及3'端的位置
- 錯誤。測定基因轉錄產物(mRNA)或編碼區 5' 及 3' 端位置通常使用 RACE (Rapid Amplification of cDNA Ends)、S1 核酸酶定位分析 (S1 nuclease mapping) 或 引子延伸法 (Primer extension)。DNA footprinting 是用來看中間哪裡被蛋白質黏住,而非測定基因的邊界。
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B. 基因組中會與調控 RNA結合的位置
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